Inleiding
In deze opzet komen de volgende onderwerpen kort aan de orde:
- De benodigde materialen
- De bereiding van het kweekmedium
- De eerste kweekfase in gesloten Drosophila voorraadflessen
- De tweede fase in insectenkooien
- Monitoren van de kweek
Materialen
Materialen voor eerste fase van de kweek in insecten-kweekpotten:
...
- Watten
- Petrischaaltjes
- Honingwater (5% oplossing)
- Respirator
- Insecten gaaskooien, leverancier Vermandel (30x30X30 cm)
Bereiding van het medium
Ingrediënten kweekmedium Drosophila suzukii: | |||
Water | 1000 | ml | |
Tarwekiemen | a | 10 | g |
Kristalsuiker | a | 15 | g |
Melasse/rietsuiker | a | 30 | g |
Glucose | a | 30 | g |
Gist | b | 35 | g |
Sojameel | b | 10 | g |
Maismeel | c | 15 | g |
Agar | c | 10 | g |
Propionzuur | 5 | ml | |
Methyl-4-hydroxybenzoaat (=Nipagine) | 2 | g | |
Ethanol | 10 | ml | |
Optioneel: | |||
Streptomycine | 100 | mg | |
Penicilline | 100 | mg |
Werkwijze
- Ingrediënten (a) apart mengen met water in een maatbeker (0,5 liter)
- Ingrediënten (b) apart mengen met water in een maatbeker (0,5 liter)
- Ingrediënten (c) apart mengen met water in een maatbeker (0,5 liter)
- Resterend water aan de kook brengen in een kookpan (ca. 2 liter)
- (c) roerend toevoegen
- (a) roerend toevoegen
- (b) roerend toevoegen
- 10 minuten roerend doorkoken
- Afkoelen tot 50/55 C
- Ethanol toevoegen
- Propionzuur toevoegen
- (Eventueel antibiotica toevoegen)
- Gieten voordat het begint te stollen!
Giet het medium in de medicijnpotjes en plaats in de diepvries
Eerste fase kweek in de kweekpotjes
- Haal de benodigde hoeveelheid kweekmedium uit de diepvries.
- Verwarm het kweekmedium in de magnetron tot het weer vloeibaar is.
- Vul de bodem van de Drosophila voorraadflessen met een dunne laag medium.
- Laat afkoelen.
- Snijdt plug in ca. 12 kleine partjes
- Voeg toe in voorraadfles:
- Breng ca. 25 volwassen fruitvliegen (m&v) in voorraadfles.
- Voeg plug partje toe (neemt eventueel vochtoverschot op).
- Sluit potje af met plug.
- Schrijf datum op het potje (=start eileg)
- Zet potjes in klimaattruimte, optimale instelling:
- Temperatuur 20°C ,
- Lange dag (L:D = 18:6).
- Luchtvochtigheid: 75-85%
- Zet potjes in klimaattruimte, optimale instelling:
- Na ca. 4 dagen de volwassen vliegen overplaatsen in nieuwe voorraadflessen
- 3-4 keer, daarna nieuwe vliegen
- De voorraadflessen met eileg onder dezelfde condities uitkweken tot volwassen vliegen ontstaan (ca 2-3 weken na eileg).
Tweede fase kweek in de insectenkooien
- Breng de volwassen vliegen vanuit de kweekpotten over in een kweekkooi. Deze ‘cohorten’ zijn na ongeveer een week voldoende oud voor experimenten (bijv. middelen proef of testen vrucht gevoeligheid vruchten voor Ds-aantasting).
- Voeg toe in de kooi:
- Potje met kweekmedium (daarin kunnen de vrouwtjes eieren leggen).
- Petrischaal met natte watten (om te drinken).
- Petrischaal met natte watten 5% honingwater (om te voeden).
- Erg belangrijk is dat het klimaat in de kweekcel aan de eisen voldoet:
- Temperatuur 20°C , Lange dag (L:D = 18:6), Luchtvochtigheid: 75-85%.
- Voeg toe in de kooi:
...
- Bij een temperatuur van 20/21 graden is de opkweekduur van ei tot vlieg circa drie weken. Bij een wat lagere temperatuur (ca. 16 graden) verloopt de ontwikkeling langzamer, maar vindt wel ontwikkeling plaats. Bij een hogere temperatuur zal de ontwikkeling van ei naar adult sneller gaan, maar een hogere temperatuur remt de eileg.
Monitoren van de kweek
- Controleer regelmatig de luchtvochtigheid.
- Controleer op schimmel- en bacteriegroei groei medium. Bij een vrij forse vervuiling (>50% potje verwijderen).
- Geen contaminatie in de kweek (andere soorten)? Neem regelmatig een monster volwassen vliegen. Gebruik hiervoor een repirator. Leg de vliegen in de alcohol (70%) en controleer op de juiste kenmerken (mannetje zwarte vlek op vleugel, vrouwtje legboor ‘zwarte kam’).