Versies vergeleken

Versie Oude versie 4 Nieuwe versie Huidige
Veranderingen gemaakt door

Former user

Paulien Vredendaal, van

Opgeslagen op

Sleutel

  • Deze regel is toegevoegd.
  • Deze regel is verwijderd.
  • Formattering is gewijzigd.

...

In deze opzet komen de volgende onderwerpen kort aan de orde:

  1. De benodigde materialen

  2. De bereiding van het kweekmedium

  3. De eerste kweekfase in gesloten Drosophila voorraadflessen

  4. De tweede fase in insectenkooien

  5. Monitoren van de kweek

Materialen

Materialen voor eerste fase van de kweek in insecten-kweekpotten:

  • Drosophila voorraad-flessen (VWR catalogus 734-1260) 

    Image RemovedImage Added

  • Pluggen VWR 734-2673

  • Respirator

    Image RemovedImage Added

  • Trechter

  • Kookpan, 2 liter                                                             

  • ‘Medicijn potjes’ (VWRI216 -1825, Pot recht 125ml PP Cl SCR Rood), 125 ml    

  • Bekerglazen, 0,5 liter

Materialen voor de tweede fase van de kweek in kweekkooien (30x30X30 cm):

  • Watten

  • Petrischaaltjes

  • Honingwater (5% oplossing)

  • Respirator

  • Insecten gaaskooien, leverancier Vermandel (30x30X30 cm)

Bereiding van het medium                                                

Ingrediënten kweekmedium Drosophila suzukii:       

Water


1000

ml

Tarwekiemen

a

10

g

Kristalsuiker

a

15

g

Melasse/rietsuiker

a

30

g

Glucose

a

30

g

Gist

b

35

g

Sojameel

b

10

g

Maismeel

c

15

g

Agar

c

10

g

Propionzuur


5

ml

Methyl-4-hydroxybenzoaat (=Nipagine)


2

g

Ethanol


10

ml

Optioneel:

Streptomycine


100

mg

Penicilline


100

mg

Werkwijze

  1. Ingrediënten (a) apart mengen met water in een maatbeker (0,5 liter)                                

  2. Ingrediënten (b) apart mengen met water in een maatbeker (0,5 liter)                                

  3. Ingrediënten (c) apart mengen met water in een maatbeker (0,5 liter)                                                     

  4. Resterend water aan de kook brengen in een kookpan (ca. 2 liter)                      

  5. (c) roerend toevoegen                        

  6. (a) roerend toevoegen                        

  7. (b) roerend toevoegen                        

  8. 10 minuten roerend doorkoken                        

  9. Afkoelen tot 50/55 C                              

  10. Ethanol toevoegen                                 

  11. Propionzuur toevoegen                     

  12. (Eventueel antibiotica toevoegen)                                     

  13. Gieten voordat het begint te stollen!                                 

Giet het medium in de medicijnpotjes en plaats in de diepvries

Eerste fase kweek in de kweekpotjes

  1. Haal de benodigde hoeveelheid kweekmedium uit de diepvries.

  2. Verwarm het kweekmedium in de magnetron tot het weer vloeibaar is.

  3. Vul de bodem van de Drosophila voorraadflessen met een dunne laag medium.

  4. Laat afkoelen.

  5. Snijdt plug in ca. 12 kleine partjes

  6. Voeg toe in voorraadfles:

    1. Breng ca. 25 volwassen fruitvliegen (m&v) in voorraadfles.

    2. Voeg plug partje toe (neemt eventueel vochtoverschot op).

  7. Sluit potje af met plug.

  8. Schrijf datum op het potje (=start eileg)

    1. Zet potjes in klimaattruimte, optimale instelling:

      1. Temperatuur 20°C ,

      2. Lange dag (L:D = 18:6).

      3. Luchtvochtigheid: 75-85%

  9. Na ca. 4 dagen de volwassen vliegen overplaatsen in nieuwe voorraadflessen

    1. 3-4 keer, daarna nieuwe vliegen

  10. De voorraadflessen met eileg onder dezelfde condities uitkweken tot volwassen vliegen ontstaan (ca 2-3 weken na eileg).

Tweede fase kweek in de insectenkooien

Breng de volwassen vliegen vanuit de kweekpotten over in een kweekkooi. Deze ‘cohorten’ zijn na ongeveer een week voldoende oud voor experimenten (bijv. middelen proef of testen vrucht gevoeligheid vruchten voor Ds-aantasting).

  1. Voeg toe in de kooi:

    1. Potje met kweekmedium (daarin kunnen de vrouwtjes eieren leggen).

    2. Petrischaal met natte watten (om te drinken).

    3. Petrischaal met natte watten 5% honingwater (om te voeden).

  2. Erg belangrijk is dat het klimaat in de kweekcel aan de eisen voldoet:

    1.  Temperatuur 20°C , Lange dag (L:D = 18:6), Luchtvochtigheid: 75-85%.

...

Opmerking: Onder deze klimaatinstellingen zijn de kweek condities gunstig voor een vlotte ontwikkeling (van ei naar volwassen vlieg) en wordt voorkomen dat het medium te snel uitdroogt (rel. hoge RV).

...

1) Op niveau houden luchtvochtigheid (erg belangrijk):

  • Plaats de kooi in een plastic zak met een kleine opening (voor luchtuitwisseling)

  • Plaats een grote petrischaal met in water verzadigd watten in de kooi. Dit is erg belangrijk. Controleer om de drie dagen of de watten nog vochtig zijn.

  • Geen vrij water in potjes/schalen (daarin verdrinken de vliegen)

2) Licht:

  • Hang een gloeilamp in combinatie met een tijdklok boven de kooien voor 16 uur licht per etmaal

3) Temperatuur:

  • Bij een temperatuur van 20/21 graden is de opkweekduur van ei tot vlieg circa drie weken. Bij een wat lagere temperatuur (ca. 16 graden) verloopt de ontwikkeling langzamer, maar vindt wel ontwikkeling plaats. Bij een hogere temperatuur zal de ontwikkeling van ei naar adult sneller gaan, maar een hogere temperatuur remt de eileg.

Monitoren van de kweek

  • Controleer regelmatig de luchtvochtigheid.

  • Controleer op schimmel- en bacteriegroei groei medium. Bij een vrij forse vervuiling (>50% potje verwijderen).

  • Geen contaminatie in de kweek (andere soorten)? Neem regelmatig een monster volwassen vliegen. Gebruik hiervoor een repirator. Leg de vliegen in de alcohol (70%) en controleer op de juiste kenmerken (mannetje zwarte vlek op vleugel, vrouwtje legboor ‘zwarte kam’).